我们采用PCR技术检测了55例鼻咽癌患者EB病毒（EBV）感染状况，同时用流式细胞术（FCM）检测了其细胞免疫水平，探讨EBV感染状况与细胞免疫水平变化的相关性，为鼻咽癌早期诊断、预后判断及分子靶向治疗提供理论基础。
1 资料与方法
1.1 检测对象
我院2003年1月～2004年3月收治的55例鼻咽癌患者，男性31例，女性24例。年龄19～75岁，中位年龄54岁。所有病例均经病理诊断确诊。选择40例同期体检健康者作为正常对照组。
1.2 标本收集
1.2.1 EBV感染检测 取组织、咽喉拭子、外周静脉血（EDTA抗凝），－20℃保存。
1.2.2 细胞免疫水平检测 空腹抽取外周静脉血2mL，肝素锂抗凝。
1.3 检测方法
1.3.1 采用PCR技术检测EBV感染状况 试剂盒购自华美生物工程公司。PCR仪（MJ公司）扩增的靶序列为EBV基因组核抗原1区，大小为269bp。1.5%琼脂糖电泳检测扩增产物，凝胶成像系统（SYNGENE公司）分析处理电泳结果。
1.3.2 采用流式细胞术（FCM）检测细胞免疫水平试剂均由库尔特公司提供。流式细胞仪（美国库尔特公司）型号为EPIC XL。
T细胞亚群采用三色法(CD4FITC/CD8PE/CD3PC5)，阴性对照为IgG1FITC/IgG1PE/IgG1PC5；NK、CIK细胞采用双色法（CD3FITC/CD16+56PE），阴性对照为IgG1FITC/IgG1PE。
取全血100μL，加三色荧光标记抗体20μL，阴性对照相同，避光室温静置20min，用Qprep自动溶血，30min后上机检测，分析外周血淋巴细胞中的T细胞亚群，其中CD3+细胞为T淋巴细胞，CD3+CD4+ 为Th细胞，CD8+为Ts细胞。同理分析可得出NK细胞（CD3-CD16+56+细胞）、CIK细胞（CD3+CD16+56+细胞）所占淋巴细胞的百分比。
1.4 统计方法
应用SPSS10.0统计软件包分析。计数资料用χ2检验，计量资料用t检验和方差分析，P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 EBV感染观察
55例鼻咽癌患者中，EBV阴性患者28例（51%），阳性患者27例（49%）。
2.2 EBV感染状况与细胞免疫水平的相关性分析
鼻咽癌患者与正常组比较，外周血CD3+细胞、CD4+细胞及CD4+/CD8+比值明显下降（P<0.01），NK、CIK细胞比例也存在明显差异（P<0.01）；阳性患者与阴性患者比较，外周血CD3+细胞、CD4+细胞及CD4+/ CD8+比值有明显差异（P<0.01），而CIK细胞、NK细胞比例无明显差异（P>0.05）。
3 讨论
EBV是一种嗜人类淋巴细胞的γDNA疱疹病毒，与鼻咽癌发生、发展密切相关，通常呈隐性感染。机体免疫功能紊乱是引起鼻咽癌的重要原因之一。细胞亚群在数量上和功能上发生异常，导致机体免疫紊乱并诱发一系列病理变化，包括肿瘤的发生、发展。CD4+ 细胞为辅助性T 淋巴细胞，在免疫监视方面发挥重要作用,它调节免疫反应的活性，辅助B 细胞产生抗体，发挥强大的抗肿瘤作用，CD8+细胞为抑制性T 淋巴细胞，可对靶细胞发生细胞介导细胞毒作用，抑制免疫反应，两者在正常情况下保持一定比例[3]。我们的实验结果表明，鼻咽癌患者外周血T淋巴细胞存在改变，其改变和紊乱的程度与患者EBV感染状况有明显相关性。EBV阳性患者较阴性患者CD4+细胞、CD4+ / CD8+比值有显著降低，说明EBＶ复制时，鼻咽癌患者细胞免疫功能受到明显抑制。提示可能由于EBＶ复制进一步抑制患者细胞免疫功能，促进病情进一步发展，患者预后越差。这与Powles等研究结果一致。监测EBV感染状况和细胞免疫水平，有助于病情进展、预后的判断。
CIK细胞与NK细胞在肿瘤免疫中发挥着重要的细胞免疫功能，能直接杀伤肿瘤细胞。鼻咽癌患者CIK细胞高表达，这可能是由于肿瘤生长促使体内产生细胞因子，从而诱导产生CIK细胞[5]。我们的实验结果还表明，病毒感染与否对鼻咽癌患者NK细胞的表达影响不明显，可能是由于NK 细胞不需致敏直接杀伤肿瘤细胞，是机体抗肿瘤的第一道防线，在控制肿瘤转移早期起主要作用。
综上所述， EBV感染与细胞免疫功能受到明显抑制显著相关。因此，以EBV基因编码的肿瘤相关抗原的分子靶向治疗，有可能成为防治鼻咽癌的新途径。
(编辑:刘辉)
